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產品信息
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NGSquant? Library qPCR kit for Illumina?
NGSquant? Library qPCR Kit for Illumina?是一種基于 qPCR 方法對 Illumina 平臺測序文庫進行 DNA 分子數(shù)絕對定量分析的試劑盒。它可以對兩端含有 Illumina P5、P7 芯片序列的各種類型 DNA 片段文庫進行高特異性的快速定量，檢測結果靈敏度高，準確度高，重復性好，適用于大多數(shù)qPCR儀器。
產品優(yōu)勢
靈敏度高 —能檢出低至 0.0002 pM 的文庫樣品；
特異性強 —使用抗體修飾法熱啟動 DNA 聚合酶，避免了 PCR 擴增前的非特異性結合；文庫定量引物采用特殊算法設計，不會形成引物二聚體；
擴增范圍廣—能檢測平均片段長度 1 kb 以內的文庫；
擴增效率高（E>0.92），實驗重復性好（R2 >0.99）。
本試劑盒包含以下四種成分：
1. 文庫DNA定量標準品（qPCR DNA standard for Illumina）：經過梯度稀釋的六份十倍比梯度稀釋的雙鏈DNA片段溶液（20 pM-0.0002 pM），經過絕對定量和嚴格質控，用于標準曲線制作；
2. 文庫定量引物（qPCR primer Mix for Illumina）：含有 Illumina P5，P7 芯片序列并經過優(yōu)化設計的一對qPCR引物；
3. 2×qPCR預混液（2×qPCR Mix for Illumina?）：含有性能優(yōu)化的抗體修飾法DNA聚合酶、qPCR反應緩沖液和SYBR Green染料等qPCR反應所需成分；
4. ROX參比染料（ROX Reference Dye）。
圖1. DNA標準品擴增曲線與熔解曲線。使用NGSquant? Library qPCR Kit for Illumina?檢測6個10倍梯度稀釋的文庫DNA定量標準品，每個標準品平行重復2次。結果顯示，試劑盒具有靈敏度高、特異性強、重復性好的特性。
圖2. 擴增產物電泳圖。使用NGSquant? Library qPCR Kit for Illumina?擴增文庫DNA標準品得到的qPCR產物，電泳分析無非特異擴增現(xiàn)象。
圖3.兩款試劑盒中標準品的對比。將GeneCopoeia的NGSquant? Library qPCR Kit for Illumina?和KAPA Library Quantification Kits for Illumina platforms的標準品用BlazeTaq NGS qMix在ABI ViiA 7進行擴增。 兩套標準品擬合出的標準曲線基本重合，對應濃度的標準品的△Ct＜0.3。
圖4：文庫擴增效率: 對不同類型的10種illumina文庫使用NGSquant? Library qPCR Kit for Illumina?分別檢測，每個文庫樣本進行6個梯度的10倍稀釋，計算出的擴增效率如上圖顯示，10個文庫的擴增效率均在90%-110%的范圍內，與擴增DNA標準品的效率相近。